AAT Bioquest KLH偶联试剂盒
产品详情
a.产品介绍
钥孔戚血蓝蛋白（KLH）是肽类偶联制备抗体时最常用的载体蛋白之一。海水养殖钥孔戚血蓝蛋白（mcKLH）来源于Concholepas concholepas软体动物，其免疫原性与 KLH 相似，但作为半抗原和肽类抗体生产的载体蛋白更稳定且高效。每个 mcKLH 分子含有多个位点，可通过胺反应性或羧基反应性交联剂与肽段及其他抗原有效偶联。目前，mcKLH 是针对半抗原或肽段生产抗体的行业标准。
ReadiLink™ KLH 偶联试剂盒主要针对免疫和抗体生产所需的半抗原 - 载体偶联物的简便制备进行了优化。该试剂盒采用羧基反应性碳二亚胺作为交联剂，通过一步法将半抗原与载体蛋白偶联，所得偶联物可用于引发针对半抗原的免疫应答及抗体生产。羧基反应性碳二亚胺可与肽和蛋白质表面暴露的羧基和氨基反应，形成稳定化学键。试剂盒包含经缓冲液配制的 mcKLH（兼容羧基反应性碳二亚胺反应）和脱盐离心柱，通过简单离心步骤即可实现优异的蛋白质回收。
实验方案要点
重要提示
以下方案为适用于多种半抗原的通用方案。请根据半抗原的大小和结构相应优化方案以提高偶联效率。使用半抗原相对载体蛋白的摩尔过量可确保有效偶联。通常，半抗原与载体蛋白质量相等的反应即可实现足够的摩尔过量。
mcKLH 溶液（10 mg/mL）
向 mcKLH 瓶（组分 A）中加入 200 µL 双蒸水，制备 10 mg/mL 溶液。
注：mcKLH 溶液通常呈半透明至白蓝色。请勿涡旋或加热溶液，以免载体蛋白沉淀。
向 mcKLH 瓶（组分 A）中加入 200 µL 双蒸水，制备 10 mg/mL 溶液。
注：mcKLH 溶液通常呈半透明至白蓝色。请勿涡旋或加热溶液，以免载体蛋白沉淀。
半抗原溶液
将最多 2 mg 半抗原溶解于 450 µL 偶联缓冲液（组分 B）中。
注：部分半抗原可能溶解度有限，可先用 DMSO（最终偶联溶液中≤30%）溶解。较高浓度的 DMSO 可能导致载体蛋白不可逆变性。
将最多 2 mg 半抗原溶解于 450 µL 偶联缓冲液（组分 B）中。
注：部分半抗原可能溶解度有限，可先用 DMSO（最终偶联溶液中≤30%）溶解。较高浓度的 DMSO 可能导致载体蛋白不可逆变性。
KLH - 半抗原工作液
将 450 µL 半抗原溶液加入 200 µL mcKLH 溶液中，得到 KLH - 半抗原工作液。
将 450 µL 半抗原溶液加入 200 µL mcKLH 溶液中，得到 KLH - 半抗原工作液。
KLH - 半抗原偶联
将一管 EDC（组分 C，10 mg）溶解于 1 mL 双蒸水中，立即取 50 µL 该溶液加入 KLH - 半抗原工作液中，轻柔混匀。室温孵育 2 小时。通过脱盐纯化偶联物，以去除未反应的交联剂和蛋白质防腐剂（如叠氮化钠）。
将一管 EDC（组分 C，10 mg）溶解于 1 mL 双蒸水中，立即取 50 µL 该溶液加入 KLH - 半抗原工作液中，轻柔混匀。室温孵育 2 小时。通过脱盐纯化偶联物，以去除未反应的交联剂和蛋白质防腐剂（如叠氮化钠）。
拧下脱盐柱（组分 E）底部封盖，旋松柱帽。将柱子置于收集管中。
以 1,000g 离心柱子 2 分钟，去除储存液。
取下柱帽，缓慢向柱中加入 1 mL 纯化缓冲液。以 1,000g 离心 2 分钟，弃去缓冲液。重复此步骤 3 次，弃去收集管中的缓冲液。
将柱子转移至新的收集管中，轻柔地将样品加到紧密的树脂床中央。
以 1,000g 离心柱子 2 分钟，收集样品。
KLH - 半抗原偶联物即可用于免疫。若需储存超过数天，应对偶联物进行无菌过滤，并于 4°C 或 - 20°C 保存。
以 1,000g 离心柱子 2 分钟，去除储存液。
取下柱帽，缓慢向柱中加入 1 mL 纯化缓冲液。以 1,000g 离心 2 分钟，弃去缓冲液。重复此步骤 3 次，弃去收集管中的缓冲液。
将柱子转移至新的收集管中，轻柔地将样品加到紧密的树脂床中央。
以 1,000g 离心柱子 2 分钟，收集样品。
KLH - 半抗原偶联物即可用于免疫。若需储存超过数天，应对偶联物进行无菌过滤，并于 4°C 或 - 20°C 保存。
注意：若偶联物需在一周内使用，可使用 PBS 进行纯化；若需冷冻保存，需使用纯化缓冲盐（组分 D）进行纯化。若偶联过程中使用了 DMSO，需用与偶联时相同比例的 DMSO 配制纯化缓冲盐，以更大限度减少脱盐过程中柱子内的沉淀。若偶联过程中出现沉淀，可离心收集上清液并保留沉淀，对上清液进行纯化后，将沉淀与纯化后的偶联物合并。
b.公司介绍
美国AAT Bioquest Inc。（前身是ABD Bioquest，Inc。）是一家为从事生命科学研究、诊断研发及药物开发的科学家研发、生产和销售生物分析研究试剂和试剂盒的公司。公司致力于光谱学检测领域，包括显色、荧光和生物发光技术。AAT Bioquest的产品帮助全世界的科学家和生物医药研究者更好的了解生物化学，免疫学，细胞生物学和分子生物学等领域。作为AAT Bioquest Inc。的中国区域代理，艾美捷科技为中国客户提供光谱学检测技术并应用于生化、生理代谢和细胞分析领域的产品，包括显色，荧光和发光技术等全系列解决方案。
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